Дицикловерина гидрохлорид

Форум Нейролептик.ру - консультации психиатра онлайн, отзывы о препаратах

Но многие также употребляют такие препараты как Ниган, Сиган и т.п. (но только вместе с кодеином).

Не говоря уже о парацетамоле который входит в состав Сигана и Тригана.

Может кто то прочтет и сделает выводы, что ну от этого хотя бы стоит отказаться.

Заранее спасибо за ответы.

Вот короткое описание:

Фармакодинамика. Ниган - комбинированное лекарственное средство. Благодаря комбинации активных компонентов - нимесулида и Дицикломина гидрохлорид - имеет анальгезирующие, противовоспалительные, спазмолитические свойства,

Нимесулид - НПВП (НПВП). Оказывает противовоспалительное, обезболивающее и жаропонижающее действие. Механизм действия связан с селективным ингибированием циклооксигеназы II и воздействием на такие факторы, как: подавление фактора активации тромбоцитов, фактора некроза опухолей, подавление протеиназ и гистамина, подавление перекисного окисления; не влияет на гемостаз и фагоцитоз. В незначительной степени действует на циклооксигеназу И практически не влияет на образование простагландина Е2 из арахидоновой кислоты, благодаря чему снижается побочное действие препарата.

Нимесулид способен подавлять синтез интерлейкина-6 и урокиназы, противодействуя разрушению хрящевой ткани. Ингибирует синтез металлопротеаз (эластазы, коллагеназы), противодействует разрушению протеогликанов и коллагена хрящевой ткани.

Обладает антиоксидантными свойствами, задерживает образование токсичных продуктов распада кислорода за счет уменьшения активности миелопероксидазы. Взаимодействует с ГКС рецепторами, активирует их путем фосфорилирования, что также усиливает противовоспалительное действие препарата.

Дицикломина (дицикловерина) гидрохлорид - спазмолитическое средство. Расслабляет гладкие мышцы желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), за счет прямого миотропного действия и частично - за счет антихолинергического действия.

Показания к применению. острой боли; симптоматическое лечение остеоартроза с болевым синдромом, первичная дисменорея

Способ применения и дозы.

Препарат назначают после тщательной оценки соотношения риск / польза. Применяют минимальную эффективную дозу в течение короткого времени для ослабления развития побочных эффектов.

У взрослых применяют внутрь по 1 таблетке 1-2 раза в сутки после еды. Максимальная доза - 2 таблетки в сутки.

Продолжительность курса лечения препаратом зависит от клинической картины, но должна быть максимально короткой, не более 5 дней.

Побочное действие нимесулида.

Со стороны ЦНС : чувство тревоги, раздражительность, сонливость, кошмарные сновидения, головная боль, головокружение энцефалопатия (синдром Рея).

Со стороны ЖКТ и печени: боль в эпигастрии, изжога, тошнота, рвота, диарея, реже - метеоризм, запор, гастрит, очень редко - диспепсия, стоматит, мелена, эрозивно-язвенные поражения ЖКТ, иногда осложненные кровотечением (язва и перфорация двенадцатиперстной кишки , желудка), повышение активности печеночных трансаминаз, печеночная недостаточность, гепатит (в том числе скоротечный с летальным исходом), холестаз, желтуха, некроз печени, обострение язвенного колита, перфорация кишечника.

Аллергические реакции: крапивница, ангионевротический отек, отек лица, псевдоанафилактические реакция, реакция Квинке.

Аллергические реакции: кожная сыпь, зуд, пожелтение кожи, дерматит, эритема, мультиформная эритема, синдром Стивена-Джонсона, токсический эпидермальный некролиз.

Со стороны системы кроветворения: гематурия, анемия, эозинофилия, редко - тромбоцитопения, панцитопения, пурпура.

Со стороны иммунной системы: редко - реакции повышенной чувствительности, анафилаксия.

Со стороны мочевыделительной системы: снижение диуреза, раздражение при мочеиспускании (жжение), дизурия, олигурия, интерстициальный нефрит, нефротический синдром, очень редко - острая почечная недостаточность.

Нарушения метаболизма: гиперкалиемия.

Со стороны дыхательной системы: редко - диспное, острый ринит, очень редко - бронхоспазм, бронхиальная астма.

Прочие: периферические отеки, гипотермия, гемотемезис, чрезмерное потение, боли в мышцах, в груди, отеки суставов, периферический цианоз, холодная и липкая кожа, стоматит, кровоточивость десен, удлинение времени кровотечения, нарушения зрения, тахикардия, колебания артериального давления, артериальная гипертензия, общее недомогание, астения.

Побочное действие Дицикломина гидрохлорида.

Возможны нарушения адаптации, ЦНС , обострения глаукомы, тахикардии, симптома раздраженного мочевого пузыря, задержка мочи, эозинофилия.

Повышенная чувствительность к компонентам препарата глаукома, эзофагит, гипертрофия предстательной железы, эрозивно-язвенные поражения ЖКТ в фазе обострения, кровотечения ЖКТ; сосудисто - мозговая кровотечение в анамнезе, другие виды кровотечений в активной фазе или любые нарушения со стороны крови, серьезные нарушение свертываемости крови, тяжелая сердечная недостаточность анамнестические данные о нападениях бронхоспазма, крапивница, острый ринит, связанные с применением ацетилсалициловой кислоты или других НПВП печеночная недостаточность, почечная недостаточность (клиренс креатинина <30 мл / мин); гепатотоксические реакции на нимесулид в анамнезе одновременное применение с потенциально опасными гепатотоксическими средствами; алкоголизм, наркотическая зависимость, повышенная температура тела и гриппоподобные симптомы, беременность, период кормления грудью, детский возраст.

В случае передозировки нимесулида возможно усиление симптомов побочного действия, возможные летаргия, сонливость, тошнота, рвота и боли в подложечной области (эти симптомы обычно обратимы при проведении поддерживающего лечения). Может наблюдаться желудочно-кишечное кровотечение, реже - артериальная гипертензия, острая почечная недостаточность, угнетение дыхания, кома. Анафилактоидные реакции наблюдались при применении терапевтических доз нестероидных противовоспалительных препаратов и могут наблюдаться при передозировке.

При передозировке Дицикломина гидрохлорид возможна курареподобное действие препарата (нервно-мышечная блокада, которая приводит к слабости мышц и возможного паралича), усиление симптомов побочного действия.

Специфического антидота нет. На протяжении всего курса лечения необходимо контролировать функцию почек и печени.

Прочитал всё и стало реально страшно. В принципе это и наркотиком назвать сложно, так препараты, обладающий антихолинергической активностью ну типа дурмана, атропина, тарена и т. д. Но все аптекарши при покупке кодтерпина советуют взять и ниган который стоит около 1й гривны(( жесть

дицикловерина гидрохлорид

Фармакотерапевтическая группа A03AA07 - антихолинергические средства, блокирующие преимущественно периферические холинореактивные системы.

Основная Фармакологическое действие: вызывает расслабление гладких мышц, проявляя спазмолитический эффект при спазмах гладких мышц желудка, кишечника, желчных путей, урогенитальной и сосудистой системы; третичный амин, имеющий антихолинергической активностью и снижает тонус гладкой мускулатуры, устраняет боль, обладает свойствами блокирующего действия антагонистической активности, избирательно парализует М холинореактивные структуры, блокируя передачу импульсов постганглионарных холинергических нервов на иннервирующие ими эффекторные органы; вызывает расслабление гладких мышц, проявляя спазмолитический эффект при спазмах гладких мышц желудка, кишечника, желчных путей, урогенитальной и сосудистой системы.

ПОКАЗАНИЯ: кишечная, почечная, желчная колики, БНФ (рекомендация к применению ЛС в Британском Национальном формуляре, 60 выпуск) дисменорея, с-м (синдром) раздраженной кишки БНФ (рекомендация к применения ЛС в Британском Национальном формуляре, 60 выпуск).

Способ применения и дозы: вводят в /м (внутримышечно) однократно по 2 мл (эквивалентно 20 мг дицикломина гидрохлорида), дозу можно повторить через 4 - 6 ч (Час) БНФ (рекомендация к применению ЛС в Британском Национальном формуляре, 60 выпуск), продолжительность лечения - не более 1 - 2 дней.

Побочное действие при применении ЛС: диспепсия, тошнота, сухость во рту, головокружение, сонливость, запор, анорексия, расширение зрачков с потерей аккомодации, фотофобия, повышение внутриглазного давления, АР (аллергические реакции ), покраснение кожи, кратковременная брадикардия, тахикардия, аритмия, недержание мочи, нарушение вкуса, жажда, покачивания.

Противопоказания к применению ЛС: гиперчувствительность к дицикломина и другим компонентам препарата, печеночная и почечная недостаточность, гипертрофия простаты, закрытоугольная глаукома, обструктивные заболевания ЖКТ (желудочно-кишечный тракт), желчных и мочевых путей, паралитическая кишечная непроходимость, язва желудка и ДПК (двенадцатиперстная кишка), тяжелая миастения, рефлюкс-эзофагит, гиповолемический шок. беременность и кормление грудью, возраст до 18 лет.

Формы выпуска ЛС: с для инъекций, 10 мг /мл по 2 мл в амп. (Ампула).

дицикловерина гидрохлорид

Дицикловерина гидрохлорид

На правах рукописи

Тумилович Екатерина Юрьевна

РАЗРАБОТКА МЕТОДИК ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИЦИКЛОВЕРИНА ГИДРОХЛОРИДА И ТРОПИКАМИДА В МОЧЕ ДЛЯ ЦЕЛЕЙ ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА

14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор,

ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

доктор химических наук, профессор

ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится «18» сентября 2012 г. в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 208.068.01 при ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Полевая, 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Минздравсоцразвития России по адресу: г. Пермь, ул. Крупской, 46.

Дата размещения объявления о защите диссертации на сайте Министерства образования и науки Российской Федерации http://www.mon.gov.ru «___» июля 2012 г. и на сайте ГБОУ ВПО ПГФА Минздравсоцразвития России http://www.pfa.ru «___» июля 2012 г.

Автореферат разослан «___» июля 2012 г.

дДицикловерина гидрохлоридиссертационного совета,

кандидат фармацевтических наук, доцент И.А. Липатникова

Лекарственные средства из группы холиноблокаторов широко применяются в медицинской практике. В терапевтических дозах препараты обладают слабым влиянием на ЦНС, однако, при употреблении высоких доз возможно развитие «холинолитического синдрома», который характеризуется двигательным и психическим возбуждением, беспокойством, галлюцинациями и другими нежелательными эффектами. Немедицинское применение данной группы средств связано с их способностью вызывать яркие зрительные галлюцинации и необычные «телесные ощущения».

Первым холинолитиком, который использовался для достижения состояния одурманивания, был циклодол. Однако в последние годы обозначилась тенденция к злоупотреблению другими, более доступными препаратами «Триган Д» и «Тропикамид», которые можно свободно приобрести в аптеке.

«Триган Д» относится к ненаркотическим анальгетикам. В своем составе препарат содержит холинолитическое вещество дицикловерина гидрохлорид и парацетамол. Препарат «Тропикамид» широко применяется в офтальмологии в виде глазных капель (0,5 и 1%) в качестве мидриатика.

Следует отметить, что препарат «Триган Д» в основном используется подростками на этапе поиска доступных одурманивающих средств. «Тропикамид» же популярен у наркозависимых лиц «со стажем». Большинство потребителей вводит «Тропикамид» внутривенно в сочетании с другими наркотическими средствами и психотропными веществами, в основном с героином. Однако «Тропикамид» применяется и как индивидуальный «наркотик».

По данным химико-токсикологической лаборатории Пермского краевого наркологического диспансера за последние три года зафиксировано 25 случаев обнаружения дицикловерина в образцах мочи, поступившей на химико-токсикологическое исследование.

Аналитическими службами Пермского края в 2011 году выявлено четырехкратное увеличение случаев обнаружения тропикамида в биологических объектах по сравнению с 2010 годом. За 2011 г. в ХТЛ ПКНД было выявлено 222 случая обнаружения тропикамида в образцах мочи (в 2010 г. – 62 случая). По данным судебно-химического отделения Пермского Бюро судебно-медицинской экспертизы за 2011 год выявлен 181 случай обнаружения тропикамида в биообъектах (в 2010 г. – 56 случаев).

Препараты «Триган Д» и «Тропикамид» в качестве средств одурманивания используются относительно недавно, поэтому актуальна разработка методик определения психоактивных веществ в биологических объектах для установления факта их немедицинского употребления и в случаях острых отравлений.

Цель и задачи исследования

Целью диссертационной работы является разработка методик обнаружения и количественного определения дицикловерина гидрохлорида и тропикамида в моче для целей химико-токсикологического анализа.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

Разработать методики предварительного обнаружения дицикловерина гидрохлорида и тропикамида в экстрактах из мочи методом тонкослойной хроматографии для этапа скрининговых исследований.

Изучить возможность совместного определения тропикамида и опиатов в моче методом тонкослойной хроматографии.

Для этапа подтверждающих исследований разработать высокочувствительные методики качественного и количественного определения изучаемых веществ в извлечениях из биожидкости с использованием современных инструментальных методов (ВЭЖХ, ГЖХ, ГХ/МС).

Изучить условия экстракции дицикловерина гидрохлорида и тропикамида из водных растворов органическими растворителями с учетом ряда влияющих факторов и разработать оптимальную методику извлечения исследуемых веществ из мочи.

Оценить пригодность разработанных методик обнаружения и количественного определения изучаемых веществ в практике химико-токсикологического анализа путем их апробации на реальных образцах мочи, поступивших на исследование в химико-токсикологическую лабораторию ГБУЗ «Пермский краевой наркологический диспансер» на наличие дицикловерина гидрохлорида и тропикамида.

Автором самостоятельно проведены исследования в качестве оператора аналитического оборудования и осуществлен анализ полученных экспериментальных данных. Автором выполнены исследования по установлению хроматографических параметров дицикловерина гидрохлорида и тропикамида в условиях анализа методами тонкослойной, газо-жидкостной и высокоэффективной жидкостной хроматографии, а также изучены условия экстракции исследуемых веществ из водных растворов и определены оптимальные условия их изолирования из мочи. На основе полученных данных разработаны методики идентификации и количественного определения исследуемых веществ.

Впервые изучены условия экстракции дицикловерина гидрохлорида и тропикамида из водных растворов и определены оптимальные условия их изолирования из мочи.

Установлены оптимальные условия разделения дицикловерина гидрохлорида и тропикамида методом тонкослойной хроматографии на пластинках «Сорбфил», обоснован способ детектирования, определена чувствительность предлагаемых детекторов к исследуемым веществам. Предложена схема обнаружения тропикамида методом тонкослойной хроматографии при совместном присутствии с опиатами в извлечении из биожидкостей.

Разработаны методики обнаружения дицикловерина гидрохлорида и тропикамида методами ТСХ, ВЭЖХ, ГЖХ и ГХ-МС, определены пределы обнаружения исследуемых веществ.

Разработаны методики количественного определения дицикловерина гидрохлорида методом газо-жидкостной хроматографии, тропикамида – методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Предложены схемы химико-токсикологического исследования дицикловерина гидрохлорида и тропикамида в моче для установления факта их немедицинского употребления.

Разработанные методики изолирования, обнаружения и количественного определения дицикловерина гидрохлорида и тропикамида в моче апробированы и внедрены в работу судебно-химического отделения ГУЗ «Самарское областное бюро судебно-медицинской экспертизы» (акт внедрения от 07.12.2011 г.), химико-токсикологических лабораторий ГБУЗ «Пермский краевой наркологический диспансер» (акт внедрения от 12.12.2011 г.), ГБУЗ АО «Амурский областной наркологический диспансер» (акт внедрения от 28.11.2011 г.), ГУЗ СПб «Межрайонный наркологический диспансер №1» (акт внедрения от 05.12.2011 г.), токсикологической лаборатории МБУЗ «Городская клиническая больница скорой медицинской помощи», г. Пенза (акт внедрения от 15.12.2011 г.).

Материалы работы внедрены в учебный процесс кафедры фармацевтической химии ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия» (акт внедрения от 22.11.2011 г.), биохимии с курсом токсикологической химии ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» (акт внедрения от 01.12.2011 г.), фармацевтической химии с курсами аналитической и токсикологической химии ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» (акт внедрения от 28.11.2011 г.).

По материалам исследования подготовлено два информационных письма: «Определение компонентов препарата Триган Д в моче при химико-токсикологическом анализе» и «Химико-токсикологическое исследование мочи на наличие тропикамида», утвержденные ученым советом ФГБУ РЦСМЭ Минздравсоцразвития России (протокол № 4 от 22 ноября 2011 г.).

Основные материалы работы доложены на межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых «Фармация в XXI веке: эстафета поколений» (Санкт-Петербург, 2009), Российской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы судебно-химических, химико-токсикологических исследований и фармацевтического анализа» (Пермь, 2009), 74-ой итоговой студенческой научно-практической конференции с международным участием, посвященной 100-летию со дня рождения проф. А.М. Дыхно (Красноярск, 2010), межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 75-летию судебно-медицинской службы в Кировской области «Актуальные вопросы судебно-медицинской науки и практики» (Киров, 2010), 85-ой Всероссийской студенческой научной конференции памяти академика АН РТ, проф. Д.М. Зубаирова (Казань, 2011), межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы судебно-химических и химико-токсикологических исследований» на базе ГБУЗ СО «Бюро судебно-медицинской экспертизы» (Екатеринбург, 2011), научно-практической конференции с международным участием, посвященной 75-летию ПГФА «Актуальные проблемы науки фармацевтических и медицинских ВУЗов: от разработки до коммерциализации» (Пермь, 2011).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Пермской государственной фармацевтической академии (номер государственной регистрации 01.9.50 007417). Тема диссертации утверждена на заседании Ученого Совета Пермской государственной фармацевтической академии 27 декабря 2007 г., протокол № 5.

По материалам диссертации опубликовано 13 печатных работ, из них 11 статей, из которых 4 – в изданиях, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (6 глав), общих выводов, списка использованной литературы, приложения. Работа изложена на 147 страницах машинописного текста, включает 22 таблицы, 49 рисунков и 51 страницу приложения. Список использованной литературы содержит 139 наименований, из них 42 источника зарубежной литературы.

Во введении обоснована актуальность выбранной темы, определена цель и задачи исследования, показана научная новизна и практическая значимость работы, приведены основные положения, выносимые на защиту.

В первой главе (обзор литературы) рассмотрены классификация и общая характеристика антихолинергических средств, фармакологическая характеристика дицикловерина гидрохлорида и тропикамида, проведено информационно-аналитическое изучение немедицинского применения холиноблокирующих средств. Рассмотрены методы, используемые в фармацевтическом и химико-токсикологическом анализе антихолинергических веществ, вызывающих одурманивание, а также способы их изолирования из биоматериала.

Во второй главе дано краткое описание объектов и методов исследования.

Третья глава посвящена исследованиям по изучению хроматографического поведения и выбору оптимальных условий предварительного обнаружения дицикловерина гидрохлорида и тропикамида методом тонкослойной хроматографии.

В главе 4 приведены исследования по разработке методик определения дицикловерина гидрохлорида и тропикамида методом газо-жидкостной и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

В главе 5 описаны исследования по экстракции дицикловерина гидрохлорида и тропикамида из водных растворов органическими растворителями с учетом влияющих факторов, выбраны оптимальные условия и экстрагенты. Предложены методики изолирования исследуемых веществ из мочи.

В шестой главе предложены схемы анализа дицикловерина гидрохлорида и тропикамида в моче для целей химико-токсикологического анализа, а также представлены результаты по апробации комплекса разработанных методик на экспертном материале, поступившем на исследование в ХТЛ Пермского краевого наркологического диспансера.

На защиту выносятся следующие положения:

Результаты экспериментальных исследований по разработке методик обнаружения и количественного определения дицикловерина гидрохлорида и тропикамида в извлечениях из мочи с использованием современных хроматографических методов: ТСХ, ВЭЖХ, ГЖХ, ГХ/МС.

Данные исследований по изучению условий экстракции дицикловерина гидрохлорида и тропикамида из водных растворов и модельных смесей мочи с учетом рН среды и природы органического растворителя.

Алгоритм химико-токсикологического исследования мочи на наличие дицикловерина гидрохлорида и тропикамида при острых отравлениях и для целей установления факта их немедицинского применения.

Методы обнаружения и количественного определения дицикловерина гидрохлорида и тропикамида

При разработке методики идентификации исследуемых веществ методом ТСХ было изучено их поведение на пластинках «Сорбфил» в хроматографических системах, широко используемых в химико-токсикологическом анализе группы «лекарственных ядов»:

диоксан–хлороформ–ацетон–25% раствор аммиака (47,5:45:5:2,5) – общая система для идентификации веществ основного характера;

толуол–ацетон–этанол–25% раствор аммиака (45:45:7,5:2,5) – универсальная система для экспресс-анализа острых интоксикаций;

этилацетат–метанол–25% раствор аммиака (17:2:1) – частная система для обнаружения опийных алкалоидов.

Поскольку в состав препарата «Триган Д» помимо дицикловерина гидрохлорида входит парацетамол, который может обнаруживаться в извлечениях из мочи, в обозначенных системах исследовался и стандартный раствор парацетамола.

Значения Rf исследуемых веществ представлены в таблице 1.

Таблица 1 – Значения Rf исследуемых веществ при хроматографировании на пластинках «Сорбфил» в различных системах растворителей (n=6)

Состав хроматографической системы

толуол-ацетон-этанол-25% р-р аммиака

этилацетат-метанол-25% р-р аммиака

диоксан-хлороформ-ацетон-25% р-р аммиака

толуол-ацетон-этанол-25% р-р аммиака

этилацетат-метанол-25% р-р аммиака

диоксан-хлороформ-ацетон-25% р-р аммиака

Полученные результаты свидетельствуют о том, что исследуемые вещества имеют удовлетворительные значения Rf во всех выбранных системах на обоих видах пластинок «Сорбфил». Значения Rf дицикловерина гидрохлорида и парацетамола указывают на их хорошее разделение в данных системах в случае совместного присутствия в биологических пробах.

С целью выбора оптимального способа детектирования зон адсорбции дицикловерина гидрохлорида, тропикамида и парацетамола на хроматографических пластинках было изучено отношение исследуемых веществ к ряду потенциальных детектирующих агентов: УФ-свет (254, 365 нм), реактивы Драгендорфа (модифицированный по Мунье), Манделина, Марки, Фреде, железа (III) хлорида раствор 30%, реактив FPN, меди сульфата и калия йодида растворы 1 моль/л, меди сульфата раствор 10% и аммиака раствор 2% в соотношении 5:1.

По результатам исследований оптимальным способом детектирования тропикамида является облучение пластинки УФ-светом при длине волны 254 нм с последующим опрыскиванием реактивом Драгендорфа.

Оптимальный способ детекции компонентов препарата «Триган Д» заключается в поэтапной обработке хроматограммы:

облучением в УФ–свете (254 нм) – наблюдается зона поглощения темно-синего цвета (парацетамол);

раствором железа (III) хлорида 30% – обнаруживается парацетамол в виде пятна синего цвета;

реактивом Драгендорфа – дицикловерин обнаруживается в виде пятна оранжево-коричневого цвета, окраска пятна парацетамола переходит из синей в оранжево-коричневую.

Предел обнаружения тропикамида при облучении УФ-светом составляет 1 мкг, при детектировании реактивом Драгендорфа – 0,5 мкг вещества в наносимом пятне.

При обработке реактивом Драгендорфа дицикловерина гидрохлорид обнаруживался при содержании в пятне 1 мкг и выше (предел обнаружения – 1 мкг).

Анализ статистических данных указывает на то, что в биопробах тропикамид часто встречается в виде комбинации с опиатами. Поэтому нами была определена возможность идентификации тропикамида совместно с морфином в частной системе для опийных алкалоидов. Поэтапная детекция компонентов осуществлялась путем обработки пластинки УФ-светом при 254 нм (отмечали зоны поглощения темно-синего цвета в зонах расположения тропикамида и морфина), далее пластины обрабатывали реактивами Марки и Фреде. При этом морфин детектировался в виде пятен красно-фиолетового цвета и сине-фиолетового цвета соответственно с Rf 0,20±0,02. После обработки пластины реактивом Драгендорфа визуализировались зоны адсорбции морфина и тропикамида в виде оранжево-коричневых пятен с Rf 0,20±0,02 и 0,69±0,03.

Исследования по установлению оптимальных условий газохроматографического определения дицикловерина гидрохлорида на хроматографе «Кристалл 2000М» сводились к выбору типа колонки (НЖФ), способа детектирования и режима программирования температуры анализа.

На основе проведенных исследований были выбраны следующие условия анализа (рис. 1):

колонка НР-5 (30 м × 0,25 мм);

температурный режим: температура детектора 280 °С; температура испарителя 260 °С; температура колонки программируемая: 160 °С – 2 минуты, подъем до 240 °С со скоростью 20 °С в минуту, далее до конца анализа температура без изменений;

скорость потока газа через колонку – 1,50 мл/мин.;

вспомогательные газы: водород, воздух;

объем вводимой пробы – 1 мкл;

время хроматограммы – 10 минут.

Дицикловерина гидрохлорид

Рис. 1 – Хроматограмма стандартного раствора дицикловерина гидрохлорида (10 мкг/ мл) в метаноле на колонке НР-5 (детектор ТИД)

В данных условиях дицикловерина гидрохлорид элюируется в виде симметричного пика со временем удерживания – 7,7±0,1 мин. Для проверки специфичности предложенных условий анализировались экстракты из модельных смесей дицикловерина гидрохлорида и мочи (10 мкг/мл), а также экстракт холостой пробы мочи. Установлено, что в выбранных условиях наблюдается четкое разделение пика исследуемого вещества и пиков соэкстрактивных веществ (коэффициент разделения пика дицикловерина гидрохлорида и ближайшего пика на хроматограмме Rs=3,6).

Для количественного определения дицикловерина в экстрактах из мочи предложен метод внутреннего стандарта. В качестве внутреннего стандарта выбран дифениламин, поскольку он хорошо разделяется с анализируемым веществом в разработанных условиях, имеет близкое время удерживания и не является объектом злоупотребления. Помимо этого дифениламин хорошо растворяется в метаноле и хлороформе, которые используются на различных этапах пробоподготовки объекта к анализу.

Для построения калибровочного графика готовили модельные смеси мочи с содержанием дицикловерина от 1 до 25 мкг в пробе (10 мл). В каждую пробу добавляли 25 мкг дифениламина. Экстракты анализировали методом ГЖХ. Пример калибровочной хроматограммы и градуировочный график количественного определения дицикловерина приведены на рис. 2 и 3.

Зависимость между концентрацией растворов и соотношением площадей хроматографических пиков дицикловерина и дифениламина описывается уравнением Sв-ва/Sвн.ст.=0,045c. Линейность градуировочного графика наблюдается во всем интервале выбранных концентраций (коэффициент корреляции составляет 0,999). Чувствительность метода – 1 нг во вводимой пробе (1 мкл).

Дицикловерина гидрохлорид

Рис. 2 – Пример калибровочной хроматограммы модельной смеси мочи, содержащей дицикловерина гидрохлорид и внутренний стандарт

Дицикловерина гидрохлорид

Рис. 3 – Градуировочный график количественного определения дицикловерина гидрохлорида методом внутреннего стандарта

При исследовании тропикамида методом газовой хроматографии в различных условиях были получены ассиметричные пики с малыми площадями. Это обусловило необходимость подбора условий дериватизации тропикамида для улучшения его хроматографических характеристик и увеличения чувствительности метода.

Поскольку тропикамид содержит в своей структуре свободную гидроксильную группу, были предложены схемы дериватизации ацилированием с помощью уксусного и пентафторпропионового ангидрида. Газохроматографическое определение вели в условиях, разработанных для дицикловерина гидрохлорида.

Установлено, что образующиеся дериваты имеют более симметричную форму хроматографического пика. Производное тропикамида с ПФПА имеет время удерживания – 8,68±0,2 минуты, производные тропикамида и уксусного ангидрида – 11,96±0,2 мин. Чувствительность метода составила 3 нг во вводимой пробе (1 мкл) для пентафторпропионового производного тропикамида, и 5 нг – для ацетильного производного.

Газовая хроматография с масс-селективным детектированием

Исследования проводились на газовом хроматографе Agilent 7890A с масс-спектрометрическим детектором Agilent 5975С на капиллярной неполярной колонке НР-5МS. Ввод пробы (1 мкл) осуществлялся автоматически без деления потока газа-носителя. Масс-детектор работал в режиме сканирования спектров электронного удара при 70 эВ в интервале от 50 до 550 а.е.м.

При разработке методики варьировали скорость потока газа-носителя, температурные режимы инжектора и хроматографической колонки. Предложены следующие условия анализа методом ГХ/МС:

Скорость потока газа-носителя (гелий) – 1 мл/мин.

Ввод пробы производится автоматически без деления потока газа-носителя.

Температура инжектора – 250 °С.

Температура интерфейса – 320 °С.

Температурная программа колонки: начальная температура – 70 °С (выдержка 5 минут), повышение температуры со скоростью 10 °С/мин. до 320 °С с выдержкой при конечной температуре 8 минут.

Время удерживания дицикловерина гидрохлорида составило 14,00±0,10 мин. (рис. 4).

Дицикловерина гидрохлорид

Рис. 4 – Хроматограмма по полному ионному току стандартного раствора дицикловерина гидрохлорида в метаноле (10 мкг/мл)

Масс-спектр дицикловерина гидрохлорида приведен на рисунке 5. Характеристические ионы в масс-спектре дицикловерина гидрохлорида: 86, 99, 71, 83 m/z (данные приведены в порядке уменьшения m/z).

Дицикловерина гидрохлорид

Рис. 5 – Масс-спектр дицикловерина гидрохлорида

При анализе тропикамида методом ГХ/МС необходима предварительная дериватизация. Пентафторпропионовое производное тропикамида имеет время удерживания 15,2±0,10 мин., ацетильное производное тропикамида – 17,3±0,15 мин. (рис. 6 и 7). Хроматомасс–спектрометрические характеристики дериватов тропикамида представлены в таблице 2.

Дицикловерина гидрохлорид

Рис. 6 – Хроматограмма пентафторпропионового производного тропикамида (режим Scan)

Дицикловерина гидрохлорид

Рис. 7 – Хроматограмма ацетильного производного тропикамида (режим Scan)

Таблица 2 – Хроматомасс-спектрометрические характеристики дериватов тропикамида

Пентафторпропионовый ангидрид и пентафторпропанол

Уксусный ангидрид и этилацетат

Относительная интенсивность характеристического иона, %

Относительная интенсивность характеристического иона, %

Наличие хромофорных групп в структуре тропикамида обусловило возможность его анализа методом ВЭЖХ со спектрофотометрической детекцией. Разработку методики идентификации и количественного определения тропикамида проводили на микроколоночном жидкостном хроматографе «Милихром А-02».

Аналитическую длину волны детектирования подбирали, исходя из анализа УФ-спектра тропикамида. В спектре аналита максимум поглощения наблюдается при 254 нм. Однако в исследованиях в качестве рабочей нами была выбрана длина волны 210 нм, при использовании которой чувствительность метода значительно повышается (рис. 8).

Дицикловерина гидрохлорид

Рис. 8 – УФ-спектр стандартного раствора тропикамида (100 мкг/мл), снятый в режиме обзорного хроматографирования

По результатам исследований выбраны следующие условия хроматографического определения тропикамида на основе градиентного элюирования:

неподвижная фаза «ProntoSIL 120-5 С18». Диаметр зерен сорбента – 5 мкм;

подвижная фаза: перхлоратный буфер – ацетонитрил;

скорость потока элюента – 100 мкл/мин;

режим элюирования – градиентный: градиент от 10% до 85% ацетонитрила за 10 мин;

объем вводимой пробы – 4 мкл;

детектирование многоволновое при 210, 220, 230, 240, 250, 260, 280 и 300 нм;

температура колонки – 35С.

Время удерживания тропикамида в данных условиях составляет 8,15 минуты (рис. 9).

Дицикловерина гидрохлоридДицикловерина гидрохлорид

Рис. 9 – Хроматограмма стандартного раствора тропикамида (100 мкг/мл) при градиентном режиме элюирования

Для установления специфичности разработанных условий и пригодности их использования в анализе биообъектов анализировались экстракты из модельных смесей мочи с тропикамидом и экстракты холостых проб. В качестве критерия полноты разделения пиков использовали коэффициент разделения пиков Rs. Установлено, в разработанных условиях тропикамид элюируется в виде симметричного пика, а пики соэкстрактивных веществ не мешают определению исследуемого аналита (рис.10).

Дицикловерина гидрохлоридДицикловерина гидрохлорид

Рис. 10 – Хроматограмма экстракта из модельной смеси мочи и тропикамида

В таблице 3 приведены хроматографические параметры тропикамида и оценена их приемлемость.

Таблица 3 – Параметры пригодности хроматографической системы

Время удерживания*, мин.

Коэффициент разделения пиков Rs

Эффектив-ность колонки (N)

Критерий приемлемости:не менее 2

Критерий приемлемости:0,8 – 1,5

Критерий приемлемости:более 2000

*- расчет проводился по 5 хроматограммам раствора

Чувствительность метода составила 1,2 нг во вводимой пробе (4 мкл).

Для определения тропикамида в моче нами был построен градуировочный график с использованием модельных смесей мочи с содержанием тропикамида от 1 до 25 мкг в пробе (10 мл) (рис. 11).

Дицикловерина гидрохлорид

Рис. 11 Градуировочный график количественного определения тропикамида в моче методом абсолютной калибровки

Установлено, что линейность отклика детектора соблюдается в выбранном диапазоне концентраций. Уравнение линейной зависимости имеет вид S=0,236c, коэффициент корреляции составляет 0,993.

Изолирование дицикловерина гидрохлорида и тропикамида

Для разработки оптимального метода изолирования исследуемых веществ из мочи нами предварительно были изучены условия экстракции дицикловерина гидрохлорида и тропикамида органическими растворителями из водных растворов. Исследовано влияние на процесс экстракции аналитов следующих факторов: природы органического растворителя и pH буферного раствора.

В качестве экстрагентов применяли следующие органические растворители: диэтиловый эфир, хлороформ, метиленхлорид и смеси хлороформ-изопропанол 9:1. Для создания определенного значения pH в растворе использовали универсальные буферные смеси Бриттона-Робинсона.

Установлено, что при использовании любого из выбранных органических растворителей дицикловерина гидрохлорид имеет высокую степень экстракции (от 50% до 100%) в широком диапазоне рН (от 3 до 12), что может быть обусловлено высоким сродством исследуемого вещества к органической фазе (коэффициент распределения Log Pоктанол/вода равен 3,98).

Поскольку тропикамид часто применяется в сочетании с опиатами, нами в качестве экстрагента апробировалась и смесь хлороформ-бутанол (6:1), широко используемая при экстракции опиатов после гидролиза.

Установлено, что оптимальными экстрагентами для извлечения тропикамида из водных растворов являются хлороформ и смесь хлороформ-бутанол 6:1. При использовании хлороформа максимальный выход тропикамида составляет 93,37% при рН 9; при использовании смеси хлороформ-бутанол (6:1) извлекается до 90,11% вещества при рН 10.

Путем эксперимента на модельных смесях анализируемых веществ и мочи было установлено, что максимальное извлечение дицикловерина достигается хлороформом при рН 2 (87,61%), тропикамида – хлороформом (86,35%) при рН 9 и смесью хлороформ-бутанол в соотношении 6:1 (71,60%).

По результатам проведенных исследований предложены следующие методики изолирования дицикловерина гидрохлорида и тропикамида из мочи:

Методика изолирования дицикловерина гидрохлорида: 10 мл мочи помещают в стеклянный флакон с навинчивающейся крышкой вместимостью 30 мл. Мочу подкисляют до рН 2 по универсальному индикатору хлористоводородной кислотой разведенной и добавляют 5 мл хлороформа. Содержимое флакона взбалтывают в течение 5 минут на механическом встряхивателе при 150 об/мин. Затем смесь из флакона переносят в делительную воронку, оставляют на 2-3 минуты для расслоения и фильтруют органическую фазу через бумажный фильтр с безводным натрия сульфатом в сухой чистый пенициллиновый флакон. Экстракцию проводят дважды. Фильтр промывают 0,5 мл хлороформа, хлороформное извлечение выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1000 мкл метанола, центрифугируют при 10000 об/мин. в течение 5 минут и подвергают дальнейшему исследованию.

Методика изолирования тропикамида: 10 мл мочи помещают в стеклянный флакон с навинчивающейся крышкой вместимостью 30 мл, прибавляют 25% водный раствор аммиака до рН 9-10 и экстрагируют двукратно хлороформом (порциями по 5 мл). Время каждой экстракции – 5 минут. Органическую фазу отделяют в делительной воронке и фильтруют через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия. Фильтр промывают 0,5 мл экстрагента, полученное извлечение выпаривают досуха, растворяют в 1000 мкл метанола, центрифугируют при 10000 об/мин. в течение 5 минут и подвергают дальнейшему исследованию.

Данные методики были апробированы на модельных смесях мочи с концентрацией анализируемых веществ – 1; 1,5; 2 и 5 мкг/мл. Результаты количественного определения веществ в биожидкости и метрологическая оценка результатов представлены в таблицах 4 и 5.

Таблица 4 – Результаты количественного определения дицикловерина гидрохлорида в модельных смесях мочи методом ГЖХ

Концентрация дицикловерина гидрохлорида в модельной смеси, мкг/мл

Метрологические характеристики (n=5, t=2,78)

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

2 + 7 =